Rekonstituce
Naposledy aktualizováno
Rekonstituce je proces, při kterém se lyofilizovaný peptid v laboratoři rozpustí zpět do roztoku připraveného k použití v experimentu. Provedena správně zachovává čistotu, identitu i biologickou aktivitu peptidu; provedena nedbale může zanést kontaminaci, částečnou degradaci nebo nekonzistentní koncentrace mezi opakováními experimentu. Volba rozpouštědla závisí na peptidu a na navazující aplikaci. Sterilní voda (kvality USP) je nejjednodušší volbou pro krátkodobou rekonstituci a poskytuje čistý nepufrovaný roztok. Bakteriostatická voda (obsahující 0,9 % benzylalkoholu) potlačuje růst mikroorganismů a hodí se pro vícedávkové lahvičky po dobu 1-28 dnů při 2-8 °C podle vlastní stability peptidu. Konkrétní pufry - PBS o pH 7,4, acetátový o pH 4-5, hydrogenuhličitan amonný pro navazující MS - se volí tehdy, když to vyžaduje izoelektrický bod, rozpustnost nebo experimentální kontext peptidu. Některé hydrofobní peptidy je nutné nejprve rozpustit v malém objemu DMSO nebo kyseliny octové a teprve poté zředit pracovním pufrem. Přidávaný objem se vypočítá tak, aby vznikla požadovaná výsledná koncentrace: vydělením hmotnosti uvedené na lahvičce objemem získáte koncentraci. Většina laboratoří rekonstituovaný roztok ihned rozdělí na jednorázové alikvoty, uloží je při -20 °C nebo -80 °C a pro každý experiment rozmrazí jeden alikvot, aby se předešlo degradaci zásobního roztoku opakovaným zmrazováním a rozmrazováním. Podmínky rekonstituce zaznamenejte do laboratorního deníku: rozpouštědlo, objem, datum, očekávanou koncentraci a případná vizuální pozorování (zákal, sraženina, zbarvení). Tato dokumentace je nezbytná pro reprodukovatelnost a recenzenti si ji při publikování výzkumu s peptidy často vyžádají.
Související
- Lyofilizovaný (sušený mrazem)
- Skladování peptidů
Poslední aktualizace: 4. května 2026