Čistota HPLC
Naposledy aktualizováno
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) je oborovým standardem pro měření čistoty peptidů. Pokud je u peptidu uvedena procentní čistota HPLC, měl by tento údaj pocházet z kalibrovaného systému HPLC, typicky s kolonou C18 s obrácenou fází a UV detektorem při 214 nm nebo 220 nm. Každý pík v chromatogramu odpovídá odlišné molekulární formě; plocha pod cílovým píkem vyjádřená jako podíl celkové plochy píků je hodnota čistoty. U výzkumných peptidů je třeba i velmi vysoké hodnoty čistoty posuzovat spolu s dalšími testy, které byly na dané šarži skutečně provedeny, a nepovažovat čistotu za důkaz molekulární identity. Volba detekční vlnové délky má význam: 214 nm zachycuje přímo absorpci peptidové vazby a je nejuniverzálnějším nastavením pro peptidy; 220 nm se někdy používá k potlačení šumu mobilní fáze, ale podhodnocuje absorbanci u peptidů bez aromatických zbytků. Gradientová HPLC (měnící složení mobilní fáze v čase) odděluje blízce příbuzné formy - zkrácené sekvence bez jednoho zbytku, oxidované varianty, racemizované zbytky - které by za izokratických podmínek koeluovaly. Úplný protokol o čistotě v certifikátu analýzy by měl uvádět typ kolony, mobilní fázi, gradientový program, průtok, detekční vlnovou délku, retenční čas cílového píku a kopii samotného chromatogramu. Jen jejich posouzení umožňuje pochopit, co uvedená hodnota čistoty pro danou šarži znamená. Peptra Labs tyto parametry zaznamenává v dostupných informacích COA u příslušných šarží.
Související
- Peptid
- Certifikát analýzy (COA)
- Hmotnostní spektrometrie (MS)
Poslední aktualizace: 4. května 2026